新闻中心
01
OD600的应用--资助了解细菌的生长状态
OD600是指在600nm波优点的吸光值 ，经常被用于剖析细菌生长和进行抗生素敏感性测试 ，在细菌检测中 ，丈量波长需要选择在生物质料吸光度最小的规模内 。因此 ，这些细菌生长曲线丈量通常使用600-670nm左右的红色波长 。在细菌连续培养历程中 ，在差别的时间点检测菌液的OD600值 ，然后以时间为横坐标 ，OD600为纵坐标 ，描绘细菌的生长曲线 。结合生长曲线 ，可以评估细菌所处的生长阶段 ，进而可以确定合适的诱导表达或收获的时间点 。
02
OD600 丈量菌液/细胞浓度的原理
细菌密度的丈量方法是通过光的散射 ，也就是看污浊水平而不是吸光度 ，光的散射水平反应的是细胞的生物质量而不是细胞个数 ，也称浊度丈量 。浊度法丈量非均质溶液中是否保存固体颗粒 。固体颗�？梢允窍赴⒊恋怼⒕奂寤蛉芤褐斜４娴娜魏纹渌烫逦镏� �？帕；嵘⑸涔馐械墓庾� ，因此仪器检测器会检测到较低的光强度 。这种现象与吸光度丈量截然差别 ，吸光度丈量是指光子被均匀溶液中的特定染料吸收 ，吸光度和浊度散射的基本区别如图 1 所示 。
图1：吸光度和浊度散射的基本区别, 在吸光度测定中 ，由于光被样品吸收 ，光电探测器中的光强会减弱（A）；在浊度测定中 ，入射光由样本中的细胞/粒子随机爆发散射 。这将导致偏向的不确定性 。继续沿直线流传的光会进入检测器 ，光强也会减弱（B）
03
使用差别的设备丈量OD600细菌浓度可能获得差别的数值
关于具有浊度的样品 ，如细菌溶液、细胞培养物 ，丈量的“吸光值”是由于光散射 ，而不是溶质分子光吸收的结果 。由于光散射的水平受系统光学特性(比色池和仪器出口狭缝之间的距离、单色器光学特性、狭缝几何特性等)的影响 ，使用差别类型的分光光度计丈量同一样品时 ，可能会获得差别的OD600读数 。
那我们来看下主要有哪些原因影响浊度的丈量呢？
一是浊度丈量受样品中颗粒浓度的影响
浊度丈量总是在异质样品中进行 ，一般需要丈量96/ 384 孔板 ，现在大都酶标仪通常使用相当窄的丈量光束 。通常情况下 ，微孔板光度计的光束直径不到一毫米 ，当光束穿过96孔板的孔时 ，丈量光束只能笼罩样品体积的很小一部分（图2） 。另外 ，现代微孔板光度计的采样时间也很短 ，通常为毫秒级 ，这些关于浊度丈量来说并不是最佳选择会增加变革 。好比液体中的固体颗粒并非处于静止状态 ，而是在整个液体中自由漂浮 。因此 ，当样品中只有少量固体颗粒时 ，在重复丈量中 ，相同数量的颗粒泛起在光束内的概率很低 。如果样品中有100 个颗粒 ，那么丈量光束区域内的颗粒数最有可能是1个 ，但随机情况下可能是0个或2个 ，甚至3个 。当采样时间也以毫秒为单位时 ，液体中颗粒的动态流动不会明显改变单个丈量中的这种情况 。因此,当OD值较低时 ，检测精度可能会明显降低 ，吸光度检测的 CVs% 也会大于正常值 。
同样 ，当样品中的颗粒数量增加到很是多时 ，从颗粒上散射的光子会撞击到另一个颗粒并重新散射 。这将导致一些散射光子经过多次散射后抵达检测器 。因此 ，浊度丈量的线性丈量规模总是低于吸光度丈量 。
二是差别仪器分光光度计的设计影响浊度丈量
吸光度和浊度丈量之间第二个很是重要的区别是 ，差别仪器的光学设计会影响所获得的OD值（图 3） 。因此 ，差别厂家生产的微孔板光度计没法对同一样品给出相同的OD值 。这里有两个影响因素：一是光电探测器收集窗口的巨细 ，二是收集狭缝的巨细 。探测器窗口越大 ，收集到的轻微散射光子就越多 ，因此视察到的OD 值就越低 �Ａ碛幸桓鲋饕侍馐茄返郊觳馄鞯木嗬� 。如果检测器距离样品很远 ，纵然是轻微散射光子也会抵达检测器；如果很近 ，纵然是强烈散射光子也会被检测器收集到 。因此 ，这个距离对得出的OD 值影响也很大 。由于每个制造商的光学设计差别 ，这两个参数（距离和探测器的大� 。┰诹教ú畋鸬囊瞧髦杏涝恫换嵯嗤� 。这些因素不会影响吸收测定 ，因为在吸收测定中光束形状坚持稳定 。检测器的巨细或距离不会改变抵达检测器的光量 。
图示3：检测器收集窗口的巨细和与样品的距离都会改变所测得的OD值 ，因此差别的仪器会对相同的样品给出差别的OD值 。检测到的OD值差别很容易抵达20-40% 。
好比下图中 ，在浊度测定结果的偏差标明 ，Multiskan Sky 和 SkyHigh 接纳了很是相似的光学设计 ，因此结果险些相同 ，但Varioskan LUX 和 Multiskan FC 接纳了差别类型的光学器件 ，因此与Sky和SkyHigh有很大差别 ，两者之间也保存明显差别 。但在吸光度丈量方面 ，所有四款酶标仪的丈量结果完全相同 。
图示4：差别型号酶标仪检测吸光度和浊度的比较
因此 ，关于OD600丈量 ，差别酶标仪的结果不可直接进行比较 。关于OD600丈量 ，使用相同型号的分光光度计可以包管良好的重复结果 。而关于差别酶标仪的结果首先需要使用适当的校准曲线进行标准化 。
通例的酶标仪检测都具备了光吸收检测功效 ，赛默飞多款酶标仪具有单独�？橛糜谧嵌燃觳� ，好比单功效酶标仪FC ，配有比色杯�？榈�Multiskan SkyHigh 以及多功效酶标仪Varioskan LUX等 ，都是核酸、卵白质、菌液浓度及其他物质丈量的多功效仪器 ，可为用户提供完善的解决计划 。
